緋村剣心（ひむらけんしん）とは『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物であり、同作の主人公。左頬の十字傷と後ろで一つ結びにした長い赤髪が特徴的な単身痩躯の男。赤い着物に白い袴姿で腰には刃と峰が逆になっている刀「逆刃刀」を差している。一見物腰穏やかな優男だが、その正体はかつて幕末最強と謳われた「人斬り抜刀斎」。 動乱の中で多くの者を殺めた過去を抱えており、その償いと太平の世を生きる人々を守るため「不殺（ころさず）」の信念を掲げて旅をする「流浪人（るろうにん）」を名乗っている。
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沢下条張（さわげじょう ちょう）とは『るろうに剣心-明治剣客浪漫譚-』やその続編『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚・北海道編-』の登場人物で、志々雄真実の精鋭部隊である十本刀の一員。二つ名は「刀狩りの張」であり、戦いを好み名のある名刀をコレクションしている。剣客としての技量も確かで、自慢の名刀を次々に持ち替え敵を翻弄する変幻自在の戦術を得手とする。残忍な性格ではあるが仲間思いな一面もあり、同じ十本刀の同士には職の斡旋なども行った。志々雄亡きあとは警察の密偵として様々な場面で登場する。
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高荷恵（たかに めぐみ）とは『るろうに剣心』シリーズの登場人物であり、会津出身の美人女医である。悪徳商人の武田観柳に命じられアヘンの精製・密造を行っていた。その後、本作の主人公・緋村剣心に助けられ、剣心たちの仲間となる。戦闘へは参加しないが、その医療技術で剣心たちの怪我を治療をしたり、客観的な立場からアドバイスを送るなど裏方的な立ち回りが多い。恵は自分を助けてくれた剣心に恋心を抱いていたが、同じ剣士という立場から彼を支えていた神谷薫には勝てないことを悟り自ら身を引いた。
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比古 清十郎（ひこ せいじゅうろう）とは『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』に登場するキャラクター。十三代目飛天御剣流（ひてんみつるぎりゅう）継承者。髪は黒く長髪で、肉体は鍛え上げられ、大きな白外套を羽織る。人間嫌いのため、山中で一人で暮らしており、陶芸家・新津 覚之進（にいつ かくのしん）として活動している。自身の才能を自画自賛するナルシストだが、それに見合う実力を持つ。主人公、緋村 剣心（ひむら けんしん）の師匠であり育ての親でもある。
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雪代縁（ゆきしろ えにし）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』に登場するキャラクターで『人誅編』で登場する物語のラスボス。主人公の緋村剣心（ひむら けんしん）に対して恨みを持つ。自身の姉であり剣心の元妻、緋村巴（ひむら ともえ）を剣心に殺された事の復讐を果たすため、上海から帰国し剣心に前に現れる。上海闇社会の頂点に立ち、強大な武器の密造・密輸を一手に取り仕切る。人誅（じんちゅう）を実行するべく、剣心に復讐心を持つ面々を集め、六人の同志（ろくにんのどうし）を結成する。
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鵜堂刃衛（うどう じんえ）とは『るろうに剣心-明治剣客浪漫譚-』に登場する人物で、明治政府の要人を暗殺していた人斬りである。凶賊「黒傘」の二つ名を持ち、幕末の頃より暗殺に従事していた。同じ人斬りであった緋村剣心との戦いに挑み、一時は好戦するほどの実力を持つ剣客であった。しかし剣心に破れ、最期は人斬りを依頼した依頼人の秘密を守るために自害する。刃衛は人を斬りたいという欲求を満たすために人斬りを行っている非常に残忍で危険な人物である。
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服部武雄（はっとり たけお）とは、『るろうに剣心-明治剣客浪漫譚・北海道編-』の登場人物で、幕末の幕府側勢力の1つである御陵衛士の一員。 思想の違いなどから御陵衛士の排除を目論んだ新選組が、京都の油小路通にて仲間たちを襲撃した際、この動きを読んで二刀流に鎖帷子を着込むという重武装で出撃。御陵衛士の最強戦力として八面六臂の活躍を見せ、斎藤一や永倉新八といった新選組最強格の剣士たちを相手に互角以上に渡り合う。最終的には敗れるも、その強さと高潔な人柄で作品内外に強いインパクトを残した。
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三条燕（さんじょう つばめ）とは『るろうに剣心』シリーズの登場人物であり、牛鍋屋「赤べこ」の従業員である。人一倍優しい性格の持ち主であるが、気が弱く引っ込み思案な性分が玉に瑕である。主人公・緋村剣心（ひむら けんしん）の仲間である明神弥彦（みょうじん やひこ）に恋心を抱いている。弥彦の勇気ある行動に燕自身が勇気をもらうことが多い。戦闘に関する能力がないため戦いの場で活躍することはないが、陰ながら剣心たちを支える人物である。
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塚山由太郎（つかやま ゆたろう）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、“実戦で使える古流剣術こそ真の剣術”を標榜する石動雷十太に心酔する少年。 雷十太の一番弟子を自称するが、実際に稽古をつけてもらったことはない。侍の血を引きながらすぐに頭を下げる商人の父を毛嫌いしており、雷十太への系統はその反発もあってのもの。緋村剣心や明神弥彦と交流し、次第に彼らに心を開くが、師と仰いだ雷十太によって腕の神経を斬られ剣の道を断たれる。続編となる『北海道編』にも、成長した姿で登場する。
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巻町操（まきまちみさお）とは『るろうに剣心』シリーズの登場人物で、京都御庭番衆（きょうとおにわばんしゅう）のひとり。若いながらも、くノ一として一目置かれ、御庭番衆御頭であった四乃森蒼紫（しのもりあおし）にも実力は認められている。本作主人公・緋村剣心（ひむらけんしん）とは東京から京都間の道中で知り合う。性格は明るく人情味があり、少々乱暴者。持ち前の明るい性格と、くノ一としての最たる実力で、仲間たちの先導役としてみんなを導いていく。
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本条鎌足（ほんじょう かまたり）とは、『るろうに剣心-明治剣客浪漫-』に登場する人物で、志々雄真実の精鋭部隊である十本刀のひとりだ。「大鎌の鎌足」という二つ名を持ち、自身の身長よりも大きい鎌をいとも簡単に操る。外見は一見したら美しい女性だが、実は男性である。首領である志々雄真実のことを誰よりも尊敬しており、志々雄が死んだ後は自分も後を追おうと考えていたが、同じ十本刀であった沢下条張に説得されその後も生きることを決意した。
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駒形由美（こまがた ゆみ）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』（るろうにけんしん めいじけんかくろまんたん）の登場人物で、志々雄真実の愛人にして世話役。 もともとは商家の娘で、賊に家族を皆殺しにされて吉原の遊女となる。持ち前の器量で花魁となると、家族の仇でもある志々雄と再会。妹分を救われ、「強い者のみが生き残る」というその強固な哲学に感服し、彼を仇と知ってなお共に歩む道を選ぶ。以降は常に側に控えて志々雄に尽くし、自身にできる形で彼の覇業を支え、その糧となって命を散らした。
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月岡津南（つきおか つなん）とは、『るろうに剣心-明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、浮世絵の絵草子で評判の浮世絵師。なお「津南」は浮世絵師としてのペンネームであり、本名は「克浩」（かつひろ）である。元赤報隊準隊士であり、相楽左之助（さがら さのすけ）とは友人関係である。赤報隊準隊士だった頃は手先の器用さを活かし、砲兵を担っていた。恩人である隊長・相楽総三（さがら そうぞう）を処刑された恨みから、明治政府を憎んでいる。そこで自作の炸裂弾を使用した爆破テロを行おうと計画していたが、剣心に阻止された。
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マグダリア小夜（マグダリア さよ）とは『るろうに剣心-明治剣客浪漫譚-』のアニメオリジナルストーリー「島原編」に登場する人物で、敬虔なキリシタン。マグダリアは洗礼名である。小夜には兄・島原翔伍がおり、小夜の姓も島原であるが本人は一度も名乗ってはいない。小夜は不治の病とも言われていた結核を患っていたが、とても清廉で美しい心の強い女性である。結核が悪化したところを相楽左之助に助けられふたりの距離は縮まるが、小夜は亡くなってしまう。
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新井赤空（あらい しゃっくう）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、幕末に数多くの殺人奇剣を打ったことで知られる刀工。物語開始時点で故人である。 欧米列強の圧力強まる中、少しでも早く日本を混乱から抜け出させたい一心で殺傷力に特化した刀を作るも、内心では「平和のために人殺しの武器を作る」自身に矛盾を感じて苦しむ。主人公の緋村剣心もまた近しい悩みを抱えていることを察して、“殺せない刀”こと逆刃刀を渡し、彼がどのような答えを出すのかを見届けようとした。
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般若（はんにゃ）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、かつて江戸城の守護を担っていた隠密御庭番衆の一員。般若は仲間内で用いている名称で、本名は不明。 戦闘能力も高いが諜報活動にも長けた上位隠密。その名の通り“般若”の面で顔を覆った忍者で、手甲を装備した上での徒手空拳による打撃を得意とする。距離感を誤らせるための縞模様の刺青を腕に施し、様々な人物の顔に変装するために自らの鼻と唇を削ぎ落とすなど、御庭番衆とその長である四乃森蒼紫に対して異常なまでの忠誠心を抱く。
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相楽総三（さがら そうぞう）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、赤報隊の隊長。物語開始時点で故人である。 赤報隊は新政府側の部隊の1つで、子供の頃の相楽左之助も同部隊に所属していた。しかし民衆を味方につけるために上からの指示で彼らが触れ回った「年貢半減」という約束が、新政府側の懐事情的に実行不可能だと明らかになると、赤報隊は“偽官軍”の汚名を着せられる。弁明のために出頭するも捕らえられ、無実の罪で処刑された。左之助にとっては大切な恩師で、相楽自身も彼に目をかけていた。
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夷腕坊（いわんぼう）／外印（げいん）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、明治政府の打倒を目論む志々雄一派の精鋭部隊「十本刀」の一員にして主人公緋村剣心の命を狙う「六人の同志」の1人。 外印は裏の人形師の末裔で、夷腕坊は彼が死体から作り出した人間そっくりの着ぐるみである。十本刀に参加したのも六人の同志に加わったのも自分の技術力を証明しようとしたからに過ぎず、剣心個人に対して含むところは特にない。偽の死体を作って物語を混乱させるが、隠密御庭番衆の四乃森蒼紫に倒された。
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比留間喜兵衛（ひるま きへえ）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、物語序盤に暗躍した悪党。 ヒロインである神谷薫の受け継いだ神谷道場の土地を狙い、これを手に入れるべく弟の比留間伍兵衛と共に様々な策を講じる。主人公の緋村剣心によって計画を阻止されるもなお諦めず、喧嘩屋の相楽左之助を利用することで再び暗躍。剣心を拳銃で狙撃するがこれを防がれ、今度こそ心折られて東京を後にする。物語終盤、不動沢という悪漢の子分として再登場し、左之助によって改めて成敗された。
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山県有朋（やまがた ありとも）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』の登場人物で、陸軍卿を務める明治政府の重鎮。 激動極まる明治維新を生き抜いた維新志士の1人であり、主人公緋村剣心とはその頃からの仲間である。当時は剣心のことをあまり良く思っていなかったが、やがてその考えを改め、現在は彼にその働きをふさわしい役職で明治政府に迎えることを望んでいる。明治政府の陸軍のトップとして、大きな事件が発生した際には兵を率いて事件に介入することが少なくない。特にアニメ版ではその傾向が顕著である。
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刈羽蝙也（かりわへんや）とは『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』に登場する人物で、志々雄真実（ししおまこと）の精鋭部隊である「十本刀」の一員。逆立った髪と極限まで絞ったガリガリの細い体に黒い翼を装着している異様な風貌が特徴。「飛翔の蝙也」という二つ名を持ち、ダイナマイトを爆発させた爆風で空を飛び上空から敵に攻撃を加える。彼の異様にやせ細った身体は空を飛ぶのに自身を軽量化させる必要があったため。志々雄の命令で京都大火や「葵屋」の襲撃を行う。
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土方歳三（ひじかた としぞう）とは、『るろうに剣心-明治剣客浪漫譚・北海道編-』の登場人物で、新選組の副長として活躍した剣士。 江戸の外れで生まれ、近藤勇や幾人かの仲間たちと共に壬生浪士組を結成。これが新選組の母体となり、幕末の京都で多大な活躍を果たす。主人公緋村剣心は「剣腕はさほどではないが戦巧者で、一番厄介な相手だった」と語っている。新選組が瓦解する中、戊辰戦争でも鬼神のごとく戦い続けるが、最後の戦場となった五稜郭の戦いで戦死した。作中では田本研造の撮影した写真の形で登場する。
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神谷越路郎（かみや こしじろう）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』及び続編の『るろうに剣心-明治剣客浪漫譚・北海道編-』の登場人物で、ヒロイン神谷薫の父親。 神谷活心流という流派の剣術家で、関東でも屈指の腕前だと評価されていた。豪放な反面弱者や若者を慈しむ優しい性格で、従軍した西南戦争では味方どころか敵に対しても慈悲をかけて奮戦。何人もの若者を守り切った末に命を落としたとされている。しかし『北海道編』で生きている可能性が取り沙汰され、主人公緋村剣心を新たな戦いの旅へと導く。
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柏崎念至（かしわざきねんじ）とは、『るろうに剣心 -明治剣客浪漫譚-』に登場するキャラクターで、かつて御庭番最恐と恐れられた御庭番京都探索方の頭領。普段の顔は京都の料亭兼旅籠「葵屋」の隠居で、通称は「翁」。明治政府転覆を目論む志々雄一派の存在を知り、彼らと対立する緋村剣心に対して強引に協力を受け入れさせるなど我が儘な一面もある。日頃は飄々としたスケベ爺であるが、捕えた敵の手に釘と蝋燭を突き刺し拷問するなど、時に残忍性を見せる。戦闘能力も御庭番衆の先代御頭とも互角に戦える実力を持つ。
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